Подсчет лимфоцитов: разновидности метода

Лейкоциты - клетки иммунной системы, отвечающие за защиту организма от проникновения патогенных микроорганизмов, развития болезни. Одним из видов этих клеток являются лимфоциты. Их определение в лаборатории позволяет выявить воспалительный процесс, развитие инфекции, состояние иммунитета человека. Для подсчета лимфоцитов применяют различные методики, каждая из них имеет положительные и отрицательные стороны. Для назначения обращаются к лечащему врачу.

Роль лимфоцитов в организме

Лимфоциты – это самая большая группа из всех разновидностей лейкоцитов. Они выполняют следующие функции:

• выработка антител, которые борются с патогенными микроорганизмами и запоминают их генетический материал;
• взаимодействие с патогенными микроорганизмами, их уничтожение различными методами (поглощение, выделение медиаторов);
• регулировка других клеток организма.

Лимфоциты также делятся на разновидности. Каждая из них выполняет определенную функцию.

• B-клетки – подтип, распознающий чужеродный белок, выделяющийся в ответ на его проникновение антитела. Они уничтожают патоген, запоминают его генетический материал, чтобы при следующем проникновении у человека не развилась острая реакция.
• Т-клетки – направлены против чужеродного микроорганизма, делятся на несколько разновидностей. Киллеры уничтожают патоген. Хелперы вырабатывают антитела. Супрессоры снижает иммунную активность.
• NK-клетки – распознают нарушения в собственных клетках организма. Способны уничтожать раковые, поврежденные, мутировавшие образования.

Элементы образуются в красном костном мозге. Они происходят из стволовых клеток. На каждом этапе дифференцировки их генетический материал перестраивается. Форменные элементы приобретают белковые молекулы, позволяющие им противостоять патогенным микроорганизмам, обезвреживать их.

В лабораторной диагностике определяется количество лимфоцитов. Если мануальный (ручной) подсчет лимфоцитов повышен, это означает, что в организме образовался инфекционный очаг. Сниженное число свидетельствуют о пониженной функции иммунной системы. Врач-лаборант оценивает параметры каждой клетки и внутреннюю структуру. Отклонение может свидетельствовать о продукции некачественных форменных элементов, развитии злокачественных процессов.

Методики подсчета количества лимфоцитов

Существуют ручные и полуавтоматические методики подсчета. К первому типу относятся:

• использование камеры Горяева;
• подсчет клеток под микроскопом;
• подсчет в биоптате.

Узнай больше о методах подсчета лейкоцитов в крови и моче.

С помощью вышеперечисленных методик врач не только рассчитывает число лимфоцитов с помощью формулы, но и рассматривает их параметры. Оценивается внутреннее содержимое, наличие мембраны, размер каждой клетки.

Если использовать обычную кровь без добавления химических реактивов, лимфоциты виды не будут. Поэтому к биологической жидкости добавляют вещества, способствующие свечению или прокрашиванию клетки:

• иммунофлюоресценция – идентификация всех поверхностных структур лимфоцитов с помощью определения различного свечения при добавлении флюоресцентной метки;
• иммуноферментный метод – добавление пероксидазной метки, что вызывает цветную реакцию при соединении фермента и субстрата, клетки становятся видны в микроскопе.

Отрицательная сторона ручных методов – возможность ошибки врача лаборанта в подготовке, расчетах. Повышен риск неправильного пересчета. Использование полуавтоматических анализаторов полностью устраняет возможность такой ошибки. Аппарат самостоятельно пересчитывает выбранные форменные элементы, заносит число на бланк анализа.

Отрицательная сторона использования полуавтоматического анализатора – отсутствие дифференцировки клеток по внешним данным. Прибор не улавливает мутировавшие, поврежденные, злокачественные образования.

Подсчет лимфоцитов в камере Горяева

Для подсчета клеток с помощью камера Горяева устройство тщательно дезинфицируют. Применяют спиртовой раствор. Если приспособление готово к работе, на нем появляются радужные полосы.

Для анализа используют капиллярную или венозную кровь. Последний вариант намного точнее. В пробирку наливают кровь до метки 0,5. Добавляют уксусную кислоту 5% до отметки 11. Получившуюся жидкость перемешивают. Уксусная кислота способствует разрушению оболочек клетки. Под микроскопом учитываются только ядра. С помощью добавления химического вещества кровь разводится в 20 раз. 

Далее методика исполняется в несколько этапов.

• В пробирку с разведенной биологической жидкостью и опускается стеклянная палочка. Ее подносят к камере и заполняют пустоты.
• Устройство должно постоять 10 минут, чтобы лимфоциты заполнили сетку камеры.
• Микроскоп наводят на углубления в камере, высчитывают все лимфоциты в 100 больших квадратах сетки.
• Полученное число подставляют в формулу для расчета. Она позволяет перевести количество клеток из разведения в мкл на 1л биологической жидкости.

Л=В×250×20×10⁶/100

• Л – число лимфоцитов в 1 л биологической жидкости;
• В – число лимфоцитов в 100 квадратах;
• 250 – множитель для перевода объёма крови;
• 20 - разведение уксусной кислотой;
• 100 - количество квадратов, в которых рассчитывались форменные элементы;
• 10⁶ – количество мкл в 1л.

Полученные данные заносятся в бланк исследования. С ним пациент отправляется к лечащему врачу. Только он сможет определить состояние здоровья пациента по результатам. Далее назначают дополнительные исследования или лечение.

Читайте о подсчете лейкоцитов в камере Горяева.

Формула подсчета лимфоцитов в крови

Для постановки диагноза необходимо знать нормальную лимфоцитарную формулу. Она зависит от возраста пациента.

Возраст пациента	Лимфоциты, %
Первые трое суток после рождения	18-28
От 3 суток до 2 недель	35-44
До шести месяцев	40-70
7 месяцев - 3 года	43-78
4-6 лет	34-63
7-9 лет	27-45
10-18 лет	25-43
Взрослые люди	23-43

Незначительное повышение или снижение показателя не говорит о появлении воспалительного процесса или заболевания. Анализ повторяют. О развитии болезни говорит повышение или снижение показателя на несколько и более единиц.

В зависимости от разновидности элементов формула представлена в процентном соотношении:

• Т-клетки – 67-80%;
• B клетки – 7-20%;
• NK-клетки – 4-20%.

В отдельности каждая разновидность может колебаться в большую или меньшую сторону. Поэтому выделяют следующие виды нарушений:

• относительное – когда 1 из категорий лимфоцитов повышена, а другая – понижена, но в сумме число клеток остается в пределах нормы;
• абсолютное – изменение большого количества одного или нескольких звеньев лимфоцитов, что в сумме приводит к сильному изменению в верхнюю или нижнюю сторону.

Если абсолютный подсчет лимфоцитов высокий, это означает, что иммунная система усиленно борется с воспалительным, вирусным, инфекционным, злокачественным процессом.

Подсчет лимфоцитов под микроскопом

Для подсчета под микроскопом используют 2 разновидности анализа.

• Камера Горяева. Клетки не фиксированы, непрокрашены. Используется только полученная биологическая жидкость. Счет ведется с помощью сетки, которая микроскопически находится в углублениях приспособления.
• Мазок крови. Получают капиллярную кровь. Каплю наносят на предметное стекло, размазывают. Сверху наливают краску, которая фиксирует и прокрашивает клетки. С помощью методики можно пересчитать форменные элементы в любое время.

Микроскоп устанавливают сверху предметного стекла. Водят окуляр слева направо, вниз, справа налево до конца образца. Врач-лаборант не только пересчитывает все лимфоциты, но и рассматривает их структуру. Можно выявить изменения в размере, структуре, прокрашивании. Определяют мутировавшие клетки или атипичные, которые могут быть признаком ракового заболевания.

А если врач-лаборант использует метод Горяева, используют специальную формулу, которая переводит микролитры в литры крови. При пересчете клеток под микроскопом, врач записывает только число единиц, которые он обнаружил. В обоих методиках добавляют данные о появлении атипичности.

Подсчет лимфоцитов в биоптате

После получения биоптата возможен ручной подсчет лимфоцитов. Методика создания мазка зависит от размера полученного биоматериала:

• нанесение образца непосредственно на стекло, если его мало;
• изготовление мазка из осадка после центрифугирования, если биоматериала много;
• изготовление мазка из осадка промывных вод (жидкость, стекающая с тканей после промывания дистиллированной водой) после центрифугирования;
• отпечаток различных поверхностей ткани, если они находятся в твердом состоянии.

После нанесения небольшого количества образца на предметное стекло, его растягивают с помощью шпателя. Отпечатки не требуют растягивания. Полученный образец окрашивают с помощью специализированных красителей. Выжидают от 20 минут до нескольких часов, в зависимости от выбранной методики. За это время все лимфоциты приобретают синий и фиолетовый оттенок.

Микроскопная мазка осуществляется с помощью передвижения окуляра слева направо, вниз, справа налево до конца образца.

С помощью методики выявляется место локализации воспалительного процесса, в котором накапливаются иммунные клетки. Лаборант оценивает качество и количество клеток. 

Подсчет лимфоцитов – методика, с помощью которой выявляют состояние иммунной системы и определяют воспалительный процесс. Возможно выявление полного числа клеток или дифференциальный подсчет лимфоцитов. Последняя разновидность позволяет выявить, какое из звеньев иммунной системы нарушено. Не рекомендуется самостоятельно приступать к лечению. Расшифровкой анализа занимается лечащий врач.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

Полезное видео