Какая диагностика на инфекции лучше - ПЦР или ИФА?

Чтобы определить вирусную природу заболевания, требуется провести лабораторные тесты. Основополагающими анализами являются ПЦР и ИФА. С их помощью можно определить генетический материал патогенного микроорганизма, чтобы своевременно начать лечение.

Что такое ПЦР

Полимеразная цепная реакция – лабораторное исследование, распознающее ДНК или РНК в заданном объеме биологической жидкости. Методику применяют не только в медицине, но и разных отраслях науки – криминалистике, клонировании генов, секвенировании, мутагенезе. Анализ помогает распознать точный генетический материал даже в малейшем количестве образца. В его основе лежат следующие данные:

• удвоение ДНК или РНК с помощью ферментов, чтобы собрать достаточное количество информации для визуального определения микроорганизма;
• возможность копирования только определенного участка генетической информации, которая требуется для исследования;
• дополнительная возможность проведения мутации, сращения сегментов генов, других манипуляций для проведения научных опытов;
• возможность определить разновидность возбудителя даже при наличии 1-2 молекул ДНК;
• определение продолжительно растущих возбудителей, не используя трудоемкие анализы;
• идентификация инфекции, передающейся половым путем, коронавируса, ВИЧ, гепатита и других микроорганизмов.

Методика проводится по следующим этапам:

• сбор биологического материала (кровь, мокрота, гной);
• нагревание образца при помощи амплификатора с добавлением высококипящего масла (цепи ДНК при этом расходятся, что называется процессом денатурации);
• отжиг – постепенное понижение температуры с добавлением праймера;
• элонгация – стадия репликации матричной ДНК, то есть цепи многократно удваивают, чтобы идентифицировать тип микроорганизма или иного вещества.

Врачу-лаборанту не требуется самостоятельно определять вид патогенного микроорганизма. За него это делает прибор. Он распечатает результат на бланке, в котором указан точный состав микроорганизмов в исследуемом образце. Так как за врача работу делает аппарат, это снижает риск врачебной ошибки.

Для сбора образца используют стерильные пробирки. Кровь или мокроту помещают внутрь, после чего сразу отправляют в лабораторию. Внутреннее содержимое не контактирует с окружающей средой.

Что такое ИФА

Иммуноферментный анализ – это качественное или количественное определение вирусов, макромолекул. Методика основана на взаимодействии антигена и антитела. Тестирование проводят поэтапно.

1. Сбор биологического образца. Это жидкости, выделения человека, в которых определяют наличие возбудителя.
2. Подготовка твердой фазы. На ней находятся антитела 2 типов (моноклональные, аффинно-очищенные).
3. Внесение образца. Его переносят в одну лунку. На соседях лунках делают контрольный и отрицательный образец.
4. Вносят конъюгат. После этого проводят отмывку, чтобы устранить несвязавшиеся антитела.
5. Выносят субстрат, проводят инкубацию.
6. Внесение образца в Ифа-ридер. Это специальный прибор, который считывает результат благодаря определению оптической плотности.

Выделяют 2 вида иммуноферментного анализа:

• качественный – определяют, есть ли в содержимом искомое вещество или микроорганизмы;
• количественный – выявление точной концентрации вещества, микроорганизма.

Результат бывает следующих видов:

• положительный;
• сомнительный;
• отрицательный.

Интересно! Благодаря тесту можно определить гормоны, онкомаркеры, антитела человека к различным возбудителям, антигены вирусов, аутоиммунные патологии. Исследование проводят повторно после терапии, чтобы подтвердить его качество.

Отличия методов исследования ИФА от ПЦР

Самостоятельно человек не сможет понять, какой метод лучше использовать для выявления возбудителя или различных веществ. Его назначает лечащий врач после осмотра и обследования. Методы отличаются друг от друга, сравнительная характеристика представлена в таблице.

Критерии	ПЦР	ИФА
Количество исследуемого образца	Определение концентрации и вида ДНК даже в микроскопических компонентах	Потребность в использование 1мл биологической жидкости
Чувствительность	98%	Не более 70%, так как прибор может упустить небольшую концентрацию возбудителя
Ложный результат	Редко	Часто, особенно при выявлении остатков продуктов метаболизма инфекции после полного выздоровления
Спектр применения	Обширный, разные области науки и медицины	Узкий, в основном метод применяется в медицине
Определяемое вещество	Генетический материал, РНК	Определение антител при связи с антигеном
Материал для исследования	Твердые и жидкие частицы организма	Сыворотка крови
Срок проведения	В течение 1 часа	Не более 3 часов
Определение стадии инфекционного процесса	Нет	Да
Определяемое вещество	Генетический материал, ДНК	Возбудители и биологические маркеры, являющиеся продуктами жизнедеятельности инфекции

Чтобы выбрать ИФА или ПЦР, пользуются критериями.

1. Благодаря иммуноферментному анализу можно выявить факт контакта организма человека с возбудителем. Полимеразная цепная реакция обнаруживает его полный антигенный состав.
2. ИФА может выявить степень распространения возбудителя по организму. Метод ПЦР информативен только в одном образце, подвергнутом исследованию.
3. ИФА обнаруживает иммунную реакцию, которая произошла после контакта с возбудителем, выявляя комплекс антиген-антитело Чем активнее развивается инфекционный процесс, тем больше проявляется результат. ПЦР обнаруживает непосредственно возбудитель, без идентификации степени реакции иммунитета.

ПЦР и ИФА тестирования одинаково востребованы в медицине. Они имеют положительные и отрицательные стороны, высокую эффективность. Важно правильно собрать биологический материал, своевременно отправить его в лабораторию.

Важно! Требуется соблюдать правила асептики, чтобы в биологический образец не попали чужеродные вещества, иначе результат будет недостоверным. Могут быть обнаружены чужеродные вещества, из-за чего пациенту поставят неверный диагноз.

Что точнее – ИФА или ПЦР?

Оба исследования точны и результативны. Но они отличаются по методике проведения, поэтому рекомендуется выполнять каждый анализ в разное время развития инфекции:

• ПЦР рекомендуется проводить для первичной диагностики, чтобы обнаружить точный вид патогенного микроорганизма в тканях, органах, биологических жидкостях;
• ИФА выполняют при доказанной инфекции, обнаруживают маркеры белков, которые могут сохраняться в организме человека продолжительное время, несмотря на лечение.

ИФА – качественные и эффективный метод диагностики. Но анализ часто выявляет подавленную инфекцию, которая может сохраняться в организме человека частично. ПЦР более результативный метод, может выявить возбудитель в микроскопических дозах. Но погрешности случаются при каждом исследовании.

Иногда данные анализов крови ПЦР и ИФА не совпадают. Если в организме развивается хроническая инфекция, ИФА бывает отрицательным, а ПЦР положительным. Это связано с тем, что первый анализ может не обнаружить инфекцию, если она сконцентрировано в микроскопических дозах. ПЦР же обнаруживает даже такую концентрацию.

Подробнее о данных методах диагностики в отношении ВИЧ и гепатитов читайте в отдельных статьях.

Источники

1. Основы полимеразной цепной реакции. Методическое пособие ООО "ДНК-тахнология". Версия 083-4. Москва.

2. Практическое пособие по иммуноферментному анализу. Национальная академия наук Украины. Технологический парк ИМК Научно-производственная компания «Диапроф-Мед». Киев, 2003.