Гемихромный метод определения гемоглобина: насколько он достоверен?

Гемоглобин (Hb) – молекула, находящаяся в эритроцитах, с помощью которой перемещается кислород. Он поступает из альвеол легких, переносится к органам и клеткам-мишеням. Определение гемоглобина является самым распространенным анализом в лабораториях. Ранее применялись методы на основе цианида, но это вещество является высокотоксичным, поэтому на данный момент применяют гемихромный метод определения гемоглобина.

Суть гемихромного метода определения гемоглобина

Гемоглобин имеет множество различных форм. Для упрощения подсчета его количества пигмент переводят в одну форму – гемихром (HbChr). Он имеет интенсивный красный цвет и длину волны 540 нм, поэтому подсчитывается легко. Его число отображает всю концентрацию Hb в исследуемой жидкости.

Для перевода гемоглобина в гемихром использует реагенты для трансформации:

• четвертичные аммониевые основания с ПАВ;
• соли жирных кислот с добавлением ЭДТА;
• SDS.

Выпускаются новые реагенты, в составе которых отсутствуют цианиды. Они основаны на додецилсульфате натрия.  Наилучшим веществом является SDS. Скорость перехода пигмента при его использовании намного выше, чем у других реактивов. Необходимо всего 5 минут. С помощью реагентов возможно использование исследования в качестве экспресс-метода. То есть возможно проведение множества анализов за 1 рабочий день. При этом пациент получает на руки готовый результат в день сдачи биологической жидкости.

В лабораториях часто используют исследования гемоглобина гемихромным методом с помощью реактивов Ольвекс. Он содержит натрия лаурилсульфат, полностью безопасный для врачей. Его достоинством является низкая стоимость при высоком качестве и продолжительном сроке годности.

Материалом для исследования является капиллярная или венозная кровь. Последний вариант используется чаще, так как исследование более достоверно. Узнайте, чем отличается анализ крови из пальца и вены.

В полученную биологическую жидкость добавляют антикоагулянт, например, ЭДТА или гепарин. Это предотвратит образование сгустка.

Исследование проводят в несколько этапов.

• В биологическую жидкость добавляют трансформирующий раствор в соотношении 20:5000 мкл. Полученный образец тщательно перемешивают. Возможно использование центрифуги. Жидкость должна тщательно перемешаться. Реагент воздействует на кровь в течение 5 минут.
• Для определения концентрации гемоглобина используют фотометр. Это оптический прибор, который подсчитывает показатель при длине волны 540 нанометров.
• Результат, полученный с помощью полуавтоматического анализатора, подставляют в формулу C =A×f, где C – концентрация гемоглобина; A – данные, полученные на фотометре; f – фактор, индивидуальный для каждого фотометра.

Полученные данные записывают на бланке исследования, передают пациенту. Он может самостоятельно сравнить результат с нормой. Но для постановки диагноза необходимо обратиться к врачу. Он выявит отклонения, назначит лечение.

На бланке исследования записывается полученные результаты, которые можно сравнить с нормой. Она разнится по возрасту и полу. Данные описаны в таблице.

Незначительное отклонение показателя не свидетельствует о появлении заболевания. Отклонение от нормы в меньшую или большую степень на несколько единиц должно быть проверено повторным исследованием. Если результат тот же, врач должен выявить причину состоянии, назначить лечение.

Плюсы гемихромного метода определения гемоглобина

Методика определения Hb с помощью гемихромного метода имеет множество положительных сторон:

• два варианта сдачи крови: забор капиллярной или венозной жидкости;
• экспресс-диагностика, которая позволяет получить результат в день сдачи исследования;
• безопасность для сотрудников лаборатории, так как методика не использует токсические реактивы, которые могут навредить здоровью;
• использование полуавтоматического анализатора, который полностью устраняет риск врачебной ошибки на этапе подсчета клеток;
• простота метода, использование дешевых реактивов, которые экономят деньги клинического учреждения;
• точность полученных показателей, благодаря которым лечащий врач определяет состояние пациента, назначает дополнительные методы диагностики и лечение;
• необходимость использования малого количества крови для анализа, если лаборант решил, что анализ недостоверной, возможно повторное тестирование;
• использование незначительного количества реактивов для одного исследования, что позволяет распределить химические вещества на множество тестирований;
• дешевизна одного реактива, что позволяет клинике закупить множество данных химических веществ.

Минусы гемихромного метода определения гемоглобина

Методика имеет отрицательные стороны, которые учитываются врачом в постановке диагноза:

• возможность врачебной ошибки на этапе сдачи крови;
• возможность неправильного приготовления реактива, использование неверных концентрации для разведения крови;
• отсутствие возможности рассмотреть форму и размер клеток, фотометр определяет только их количество.

Показания к применению гемихромного метода

Методика для подсчета количества гемоглобина проводится в лабораториях постоянно. Для назначения исследования необходимы различные показания.

• Диспансеризация человека для определения состояния его здоровья. В этом случае исследование проводят 1 раз в год.
• Системные заболевания, вызывающие снижение гемоглобина. К ним относят недостаток витаминов и фолиевой кислоты, различные форы анемии, нарушение образования форменных элементов в костном мозге.
• Проверка здоровья беременной женщины. Во время беременности показатели могут быть незначительно или резко снижены. В первом случае терапевтические меры не требуются. Если показатель снижен значительно, назначают препараты, способствующие его повышению, так как дефицит гемоглобина может негативно сказаться на росте формирование плода.
• Проверка количества гемоглобина во время лечения. Врач корректирует дозировку лекарственных препаратов или заменяет их на другие медикаменты.

Возможные ошибки в применении гемихромного метода

Во время проведения методики могут быть допущены ошибки, которые приведут к получению неправильного результата:

• неправильно настроенный прибор, допущение ошибки в его калибровке;
• неверный расчет показателя с помощью формулы;
• неверная дозировка раствора или крови, ошибка в подборе пипеток для взятия определенного количества жидкости;
• стояние полученного образца чрезмерно продолжительное количество времени;
• использование неправильных реагентов или истечения срока их годности;
• использование высоких или низких температур во время исследования;
• ошибка во время забора крови (работа кулаком, резкое перемещение пациента из лежачего состояние в положение сидя);
• отсутствие добавления антикоагулянта, вследствие чего образуется сгусток и проведение анализа невозможно;
• использование загрязненных приборов для хранения, перенесения, исследования биологической жидкости.

Для исключения ошибок в полученных данных врач должен назначать несколько анализов. Если результаты будут схожи, это говорит о правильности исследования. Ошибки могут быть не только в лаборатории, но и в неправильной подготовке пациента. Поэтому врач должен предупредить о необходимых действиях, которые он должен совершить до исследования. 

Гемихромный метод определения гемоглобина – исследование последнего поколения, которое предотвращает воздействие токсических веществ на организм врачей-лаборантов. Показатели, полученные с помощью методики достоверны. Определение количества гемоглобина помогает лечащему врачу в постановке диагноза, определении состояния пациента. Важно правильно подготовиться к исследованию, чтобы исключить риск ошибки. 

Читайте о том, какие методы определения гемоглобина в крови еще существуют.

Автор статьи

Екатерина Беликова

врач лабораторной диагностики

В 2014 г. с отличием окончила Северо-Кавказский федеральный университет по специальностям "Медицинская биохимия" и "Клиническая лабораторная диагностика.

Специально для Mirmam.pro

Полезное видео